Tip:
Highlight text to annotate it
X
W etapie czwartym będzie odwrócić naszych wstępnych sieciowania białka z DNA, a następnie
oczyszczanie DNA. Początek każdego IP poprzez próbkę oraz wejściowa które
nie przechodzą przez poprzednich etapach IP i dodać 8 mikrolitrów 5 molowym sodu
Chlorek z 200 próbek mikrolitrowych następnie wirowanie.
Inkubować w temperaturze 95 ° C przez 15 minut. Aby oczyścić każdą próbkę użyjemy wiążące DNA kolumny krzemionki według
z instrukcjami producenta. Najpierw dodać każdą próbkę do odpowiednich ilościach
DNA w buforze wiążącym wiru, a następnie przenieść do każdej próbki umieszczony w kolumnie
probówkę. Wirówka kolumn w 15000 g w ciągu 1 minuty.
Wyrzuć przepływu przez z probówki i dodać bufor do przemywania DNA do każdej kolumny.
Odwirować przy 15000g kolumny na minutę. Wyrzuć przepływu przez z probówki
i spin pustych kolumn przy 15000g przez dwie minuty, aby mieć pewność, że są całkowicie suche.
Wyrzuć stary probówki i umieścić kolumnę oczyszczania do nowej probówki czyste.
Dodaje 50 mikrolitrów buforu unik DNA bezpośrednio do membrany w kolumnie.
Odstaw na minutę, a następnie dokonać ostatecznej wirują 15000g przez 1 minutę.
Wyrzucić kolumnę do oczyszczania i zapisać DNA oczyszczono przy -20 stopniach Celsjusza aż do czasu ostatniej fazy.